METHODS
Mice : C57BL/6J
- IL-4-deficient mice : neomycin resistance gene을 IL-4 gene의 exon 3에 삽입해 제작
- Mcpt8DTR/+ mice : basophil 특이적 유전자인 Mcpt8의 UTR 영역에 human diphtheria toxin receptor와 GFP가 융합된 cDNA와 IRES를 삽입
- IL-4 reporter G4 (Il4GFP/+) mice : IL-4 gene의 첫번째 exon과 첫번째 intron의 178개 nucleotide가 enhanced GFP를 지정하는 유전자로 대체
- Mcpt8^iCre/+ : basophil 특이적 Mcpt8 gene의 첫번째 exon이 improved Cre(iCre)로 대체
- IL4^fl/fl mice : IL-4 gene의 exon 3 upstream intron과 enxon 4 downstream intron에 loxP sites 삽입
OX-induced mouse model of AD
- 첫 challenge 7일 전, OX를 acetone과 olive oil 4:1 비율에 용해시켜 7~10주령 마우스의 면도한 복부에 100μl의 3% OX를 epicutaneously 감작 그 후 격일로 10μl의 0.5% OX를 양쪽 귀와 등과 복부에 도포
Depletion of basophils in mice
- Mcpt8DTR/+ mice에 500ng의 DT와 불활성화된 mutant DT를 첫 challenge 하루 전과 4일 후 정맥주사
이 방법은 basophil을 유전적으로 targeting해 basophil의 생산을 줄이는데 중점을 둔다.
- 항체 매개 basophil 고갈에서는 150µg의 anti-CD200R3 monoclonal antibody(Ba103)나 control rat IgG2b(RTK4530)를 Day -1, 3, 7에 IP
이 방법은 이미 만들어진 basophil을 targeting하여 제거한다.
