[연구기초상식] cell viability를 보는 법

Cell viability를 보는 법에는 다양하다. 오늘은 그 중 2가지 방법에 대해 알아보자.

 

1) MTT assay

 

세포 생존 및 생장 등 세포 대사 활성을 평가하는 비색 분석법으로 살아있는 세포의 미토콘드리아 속 dehydrogenase에 의해 formazan이라는 발색물질로 전환되는 tetrazolium salt 유도체인 MTT 이용한 방법이다.

 

프로토콜

 

1. 96well plate에 well당 cell 1x10^4~6(cell에 따라 다양) 100㎕씩 분주하여, 24시간 정도 CO2 incubator에서 배양

 

2. 배지를 바꿔주고, 준비된 실험물질 첨가

 

3. 적절한 시간 동안 incubator에서 배양

 

4. MTT 용액 첨가 후, 실험 조건에 맞게 적절한 시간 동안 incubator에서 반응 

 

5. DMSO 첨가해 물에 녹지 않는 formazan crystal을 녹인다.

 

6. Plate reader를 이용하여 흡광도를 측정

 

 

 

2) Ez-cytox

 

MTT assay 를 대체할 수 있는 제품으로 WST(water soluble tetrazolium salt)를 사용하여  MTT 보다 쉽고 간편한 방법으로 cell viability, proliferation, cytotoxicity를 정확하게 측정할 수 있는 assay kit 이다.

 

WST(water soluble tetrazolium salt)는 물에 잘 녹는 수용성 염으로 세포 배양액에 직접 첨가할 수 있으며, 미토콘드리아의 호흡사슬에 존재하여 살아있는 세포에서만 활성이 있는 탈수소효소(Dehydrogenase)인 succinate-tetrazolium reductase에 의해 환원되어 formazan이라는 발색물질을 생성하여, 세포의 대사 활성에 따라 오렌지 색으로 변하는 특징을 가진다. 

 

이를 통해 흡광도를 측정하며, 이 흡광도가 증가할 수록 살아있는 세포 수가 많다는 것을 의미한다고 볼 수 있다.

 

프로토콜

 

1. 96well plate에 well당 cell 1x10^4~6(cell에 따라 다양) 100㎕씩 분주하여, 24시간 정도 CO2 incubator에서 배양

 

2. 다양한 농도로 준비된 실험물질을 각 well에 10㎕씩 첨가

 

3. 실험 조건에 맞게 적절한 시간 동안 incubator에서 반응 

 

4. EZ-Cytox 10㎕를 각 well에 첨가

 

5. incubator에서 반응

 

6. Plate reader를 이용하여 흡광도를 측정

 

 

두 실험간의 차이와 대략적인 프로토콜에 대해 알아보았다.